人臍帶單核細(xì)胞提取物操作要點(diǎn):
1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱;準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2)將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫(可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍,使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi),將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi),輕輕吹打液體,使細(xì)胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細(xì)胞懸液。
5)將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi),補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻,放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6)第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細(xì)胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代,細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實驗。
alpha 2 Macroglobulinα2巨球蛋白抗體
ACCSLACCSL蛋白抗體
AFP甲胎蛋白抗體
Mint3β淀粉樣前體蛋白結(jié)合蛋白3抗體
ASTN2星形肌動蛋白抗體
TREX1系統(tǒng)性紅斑狼瘡相關(guān)蛋白TREX1抗體
phospho-ATRIP 磷酸化系統(tǒng)性紅斑狼瘡先關(guān)蛋白TREX1抗體
Phospho-ATRIP 磷酸化系統(tǒng)性紅斑狼瘡相關(guān)蛋白TREX1抗體
AP2M1接頭相關(guān)蛋白復(fù)合體AP-2μ鏈1抗體
Phospho-AP2M1 磷酸化接頭相關(guān)蛋白復(fù)合體AP-2μ鏈1抗體
Annexin A7膜粘連蛋白7抗體
C3orf153號染色體開放閱讀框15抗體
APOB48R載脂蛋白B受體抗體
ABCA2三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2抗體
ApoB 載脂蛋白B抗體
ALOX15B花生四烯酸15脂氧合酶2抗體
APOC4載脂蛋白C4抗體
ARH低密度脂蛋白受體銜接蛋白抗體
AUP1原始廣泛存在蛋白1抗體
ANKRD37錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白37抗體
A4GALTα1,4-半乳糖基轉(zhuǎn)移酶1
AGTRAP血管緊張素Ⅱ受體相關(guān)蛋白抗體