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小鼠誘導型一氧化合成酶(iNOS)試劑盒操作步驟
點擊次數(shù):387 更新時間:2023-03-15

小鼠誘導型一氧化合成酶(iNOS)試劑盒操作步驟:


1. 標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔10孔,在di一、第二孔中分別加標準品100μl,然后在di一、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從di一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為180 ng/L,120 ng/L ,60 ng/L,30 ng/,15 ng/L)。

2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4. 配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

7. 溫育:操作同3。

8. 洗滌:操作同5。

9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘。

 細辛醛英文名稱:Asarylaldehyde14374-62-0分子式:196.19988

 仙茅苷英文名稱:Cents a85643-19-2分子式:466.44

 相思豆堿 英文名稱:Acacia base21339-55-9分子式:218.25

 香蒲新苷英文名稱:Typhaneoside104472-68-6分子式:770.68528

 香葉木素英文名稱:Diosmetin520-34-3分子式:300.26

 小豆蔻明英文名稱:Adzuki beans Kou Ming19309-14-9分子式:207.28

 辛弗林英文名稱:Synephrine1994/7/5分子式:167.20502

 辛可尼丁英文名稱:Sin Coenen Martin485-71-2分子式:294.39

 辛可寧英文名稱:Xin Kening118-10-5分子式:294.39

 辛夷脂素英文名稱:Fargesin31008-19-2分子式:370.39578

 新綠原酸英文名稱:Neochlorogenic acid906-33-2分子式:354.31

 新芒果苷英文名稱:New mango64809-67-2分子式:584.48022

 雄烯二酮英文名稱:Two ketones1963/5/8分子式:286.40854


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