總結(jié)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中的失誤
點(diǎn)擊次數(shù):812 更新時(shí)間:2016-05-26
.實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)掌握實(shí)驗(yàn)室基本操作具備基本素質(zhì)和具有一定的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)。可以熟練使用實(shí)驗(yàn)儀器、器械,善于總結(jié)和分析問題,對于實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的意外情況能穩(wěn)重妥善解決。
2.在操作前必須仔細(xì)閱讀說明書,嚴(yán)格按照說明書要求進(jìn)行規(guī)范操作,不同批號的試劑千萬不能混用。在反復(fù)試驗(yàn)確定成立后方可改進(jìn)。
3.必須嚴(yán)格控制反應(yīng)時(shí)間,如果反應(yīng)時(shí)間過長,酶會(huì)失有可能造成假陰性。
4.評估試劑的實(shí)用性,試劑是否穩(wěn)定,對準(zhǔn)確率的高低到頭重要。在使用試劑前,應(yīng)進(jìn)行陰、陽對照及樣品反復(fù)比照試驗(yàn),判定試劑符合要求后方可使用。
5.使用校對過的微量移液器可以排除自然誤差,移液器準(zhǔn)確與否對定量檢測尤為重要。
6.加樣不僅要做到快速也必須保證準(zhǔn)確。如若加樣不準(zhǔn)確,酶生成物的量不能確定直接影響顯色結(jié)果。顯色的深淺及A值的測定與加入顯色劑和終止液的量有關(guān),所以加樣需慎重。如果加樣遲緩會(huì)出現(xiàn)誤差,如果試劑長時(shí)間暴露在外,尤其室溫過高時(shí),保存期會(huì)縮短甚至失效。
7.嚴(yán)格掌握顯色時(shí)間,如若顯色時(shí)間過短加入終止液反應(yīng)終止后底物結(jié)合物的量過少,易出現(xiàn)假陰性。超過顯色要求時(shí)間后顯色,應(yīng)判為假陽性,這可能與試劑本身有關(guān)。加顯色劑后立即顯色,不可報(bào)陽性,這可能是本底顯色的結(jié)果。
8.洗滌一定要*,如果洗板不*,酶結(jié)合物本底顯色會(huì)呈現(xiàn)假陽性。另外需要注意洗滌液要新鮮,現(xiàn)用現(xiàn)配,陳舊的洗滌液會(huì)出現(xiàn)本底增高現(xiàn)象,也可能會(huì)出現(xiàn)假陽性。